磺胺二甲嘧啶酶联免疫试剂盒质量标准

来源：  发布日期：2011-09-03  发布者：晓天  共阅1531次

本品系用磺胺二甲嘧啶(SM2)偶联蛋白的抗原、磺胺二甲嘧啶单克隆抗体和酶标记羊抗鼠及其它试剂制成。用于定量、定性检测猪组织、鸡组织、虾、鸡蛋、蜂蜜中磺胺二甲嘧啶的残留量。

【物理性状】试剂盒外观完整，内装试剂齐全。包被抗原的酶联板透明干燥且用真空包装。磺胺二甲嘧啶抗体工作液、底物溶液、终止液、标准品溶液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液为透明溶液，酶标记物为浅黄色溶液，试剂无菌检验均应合格。

【灵敏度测定】 取已包被好的酶标板12孔，每两孔分别加入0?g/L、1?g/L、3?g/L、9?g/L、27?g/L、81?g/L标准溶液各50?L，再加入SM2抗体50?L，37℃反应30min，取出洗板5次，拍干，加入100?L酶标二抗，37℃反应30min，取出洗板5次，拍干。加入底物液各50?L，避光37℃反应15min，用50uL终止液终止反应，置450nm波长处测定吸光度值。每一浓度标准溶液吸光度值（B）平均值除以第一个标准（0标准）吸光度值（B0）的平均值再乘以100％，即百分吸光度值。以SM2浓度(?g/L)的自然对数值为X轴，百分吸光度值为Y轴，绘制标准曲线图。

IC50（即0浓度标准溶液的吸光度值50%处所对应的SM2浓度）范围应在1.4?g/L～3.8?g/L之间。

【特异性测定】 取已包被好的酶标板18孔，每两孔分别加入0?g/L、1?g/L、3?g/L、9?g/L、27?g/L、 81?g/L标准溶液和阴性样本提取液、10?g/kg和20?g/kg磺胺二甲嘧啶添加的阳性样本提取液各50?L，再加入SM2抗体50?L，37℃反应30min，取出洗板5次，拍干，加入100?L酶标二抗，37℃反应30min，取出洗板5次，拍干。加入底物液各50?L，避光37℃反应15min，用50?L终止液终止反应，置450nm波长处测定吸光度值。每一浓度标准溶液吸光度值（B）平均值除以第一个标准（零标准）吸光度值（B0）的平均值再乘以100，即百分吸光度值。以SM2浓度(?g/L)的自然对数为X轴，百分吸光度为Y轴，绘制标准曲线图。从标准曲线中查出阴性样品和10?g/kg和20?g/kg SM2添加的样品的测定浓度。

阴性样品测定值应在2.0?g/kg以下，10?g/kg 和20?g/kg 磺胺二甲嘧啶添加组织样品的回收率在55.0％~120.0％之间。

【精密度测定】 取已包被好的酶标板32孔，每两孔分别加入0?g/L、1?g/L、3?g/L、9?g/L、27?g/L、81?g/L标准溶液各50?L，其它20孔加入9?g/L的标准溶液50?L，再加入SM2抗体50?L，37℃反应30min，取出洗板5次，拍干，加入100?L酶标二抗，37℃反应30min，取出洗板5次，拍干。加入底物液各50?L，避光37℃反应15min，用50?L终止液终止反应，置450nm波长处测定吸光度值。

20个微孔的9?g/L标准溶液的吸光度值变异系数(%)应≤25%（n=20）。

【适用范围】 用于定量、定性检测猪和鸡组织（肌肉、肝脏等）、虾、鸡蛋、蜂蜜中磺胺二甲嘧啶的残留量。

【用法和结果判定】

1.1 稀释复溶液：将2X浓缩复溶液摇匀，用水以1：2比例稀释，临用前配制。

1.2 稀释洗涤液：将20X浓缩洗涤液摇匀，用水以1：20比例稀释，临用前配制。

2．样品前处理

2.1 猪和鸡组织（肌肉、肝脏）样本处理方法

2.1.1 取适量组织用匀浆机10000r/min匀浆1 min，称取5±0.05g匀浆物置离心管中，加入15mL乙腈水溶液（84 v +16 v）混合，剧烈振荡10min。于15℃，3000g以上速度离心10min；

2.1.2 取3mL上清液，加入2mL水和5mL乙酸乙酯，混合振荡10min，15℃，3000g以上速度离心5min；

2.1.3 将上层液移另一管中用氮气吹干（或鸡心瓶中，50℃减压蒸干）；

2.1.4 用1mL稀释好的复溶液充分溶解干燥的残留物，加入异辛烷1mL振荡2min。15℃，3000g，离心5min，除去上层液；

2.1.5 取50?L水相进行分析。

2.2 鸡蛋和虾样本处理方法同猪、鸡组织样本处理方法。

2.3 蜂蜜样本处理方法

2.3.1 取1g蜂蜜，放入离心管中，用2mL稀释好的复溶液溶解；

2.3.2 加入8mL乙酸乙酯上下剧烈震荡10min；

2.3.3 室温3000g以上速度离心10min；

2.3.4 移取1mL上层乙酸乙酯（相当于0.1g样品）到另一离心管中，50~60℃氮气流下蒸干；

2.3.5 残留物用稀释后的0.5mL复溶液溶解；

2.3.6 取50 ?L水相进行分析。

2.　 检测步骤

2.1　 将所需试剂从冷藏环境中取出，置室温（20~24℃）平衡30min以上, 注意每种液体试剂使用前均须摇匀。

2.2　 按需要取出微孔条及板架，将不用的微孔密封放入自封袋，保存于2~8℃。

2.3　 编号：将样品和标准品对应微孔按序编号，每个样品和标准品均需做

2孔。

2.4　 每孔加标准品或样本50μL，然后加抗体工作液50μL，用盖板膜盖板，37℃环境中反应30min。

2.5　 取出酶标板甩出孔内液体后用洗涤液按每孔250μL,洗板4~5次，每次浸泡10s，用吸水纸拍干。

2.6　 加酶标二抗工作液，每孔100μL，用盖板膜盖板后置37℃环境中反应30min。取出按2.6操作

2.7　 显色：每孔加入显色剂A液50μL，再加B液50μL，轻轻振荡混匀，37℃环境中避光显色15min。

2.8　 测定：每孔加入终止液50μL，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测），测定吸光度值（OD值）。

3. 结果判定

所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值（B）除以第一个标准（0标准）的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。 百分吸光度值（%）＝
B
×100%

B0



B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值

B0—0?g/L标准溶液的平均吸光度值

以标准品百分吸光率为纵坐标，以磺胺二甲嘧啶标准品浓度的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中磺胺二甲嘧啶实际浓度。

若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样品的准确、快速分析。

【储藏条件和保存期】 试剂盒应在2~8℃保存，保存期为6个月。

【规格】 每个试剂盒含96孔板一块；SM2标准品1mL/瓶（0?g/L、1?g/L、3?g/L、9?g/L、27?g/L、 81?g/L）；SM2抗体工作液1瓶，7mL；酶标二抗工作液1瓶，12mL；20X浓缩洗涤液1瓶，40mL；2X浓缩复溶液1瓶，50 mL；底物液A液1瓶，7mL；底物液B液1瓶，7mL；终止液1瓶，7mL；高浓度标准品（1?g/mL）1瓶，1mL；盖板膜1张；自封袋1个；说明书1份；质量报告1份。

【注意事项】

1、试剂盒在缓冲液配制和液体分装上要做到无菌，防止试剂变质。

2、试剂盒标准品应经过严格配制后方可用于试剂盒中。

3、添加回收用的高浓度标准品需经过试剂盒自身标准验证，合格后方可用于特异性和准确度监控用。

4、格按照质量标准所述用法和结果判定内容进行试剂盒质量控制。

5、在试剂盒老化实验中出现有不合格现象，则视该批试剂盒为不合格。

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